- IHC结果的判读
- FISH结果的判读
- CISH结果的判读
IHC结果的判读
（1）方法：①先在10倍物镜下进行判读；②注意细胞膜完全着色的癌细胞比例及着色强度；③胞质着色应忽略不计；④只评定浸润性癌的着色情况；⑤正常乳腺上皮不应着色；⑥建议使用国际公认的ASCO/CAP指南推荐的评分系统。
（2）结果判读标准（按每张切片计）
0：无着色（图20-4A）。
1+:任何比例的浸润性癌细胞呈现微弱、不完整的细胞膜着色（图20-4B）。
2+：>10%的浸润性癌细胞呈现弱至中等强度、完整但不均匀的细胞膜棕黄着色（图20-4C）；或<30%的浸润性癌细胞呈现强且完整的细胞膜棕褐着色。
3+：>30%的浸润性癌细胞呈现强且完整的细胞膜棕褐着色（图20-4D）。
图20-4 采用IHC检测HER-2结果的判读
对于2+的病例，应该用FISH、CISH或重复IHC作进一步检测，也可以选取不同的组织块重新检测或送其他有质量保证的实验室进行检测。如仍不能确定，则需要与临床医师沟通，有利于治疗方案的确定。
FISH结果的判读
（1）方法：首先在HE染色切片上确认浸润性癌区域，然后在10倍物镜下，于FISH切片上找到与HE染色切片上相同的组织细胞结构。要求至少找到2个浸润性癌区域。然后在40倍物镜下扫描整张切片，观察是否存在HER-2表达的异质性以及切片的质量。再于100倍物镜下通过特异的单通道滤光片观察癌细胞核的FISH结果，并进行信号计数和比值计算。杂交信号计数：应选择细胞核大小一致、胞核边界完整、DAPI染色均一、细胞核无重叠、绿色CEP17信号清晰的细胞，随机计数至少20个肿瘤细胞核中的双色信号。
（2）结果判读标准
1）橘红色信号的总数与绿色信号的总数比值<1.8提示无扩增（图20-5A）；比值>2.2提示HER-2基因扩增（图20-5B）。
图20-5 采用FISH检测HER-2结果的判读
2）若众多信号连接成簇时可不计算，视为基因扩增。
3）若比值为1.8～2.2，则需要再计算20个肿瘤细胞核中的信号或由另外一位分析者重新计数。如仍为临界值，则应在FISH检测报告中注明，或重复进行FISH或IHC检测。
4）若HER-2基因扩增在不同肿瘤细胞中存在异质性时，应在另外肿瘤区域再计算20个以上肿瘤细胞核中的橘红色、绿色信号比值，报告其最大值，并加以注释。
在观察信号时，应根据情况随时调节显微镜的焦距，准确观察位于细胞核不同平面上的信号以免遗漏。
CISH结果的判读
在普通显微镜亮视野下40倍物镜观察。计数30个细胞内信号点，再计算平均数。如果计数30个细胞，发现超过50%的肿瘤细胞核内有4～6个信号点，则应再计数30个细胞。无扩增：浸润性癌细胞平均HER-2拷贝数<4；扩增：浸润性癌细胞平均HER-2拷贝数>6。对于平均HER-2拷贝数4～6和难以判断的标本，应经FISH重新检测。CISH检测报告的相关内容尚未见文献依据，可参照IHC和FISH报告的相关内容。
